产品货号:
JN3015
中文名称:
热启动Tth DNA聚合酶
英文名称:
HotStart Tth DNA Polymerase
产品规格:
250U|1250U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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热启动Tth DNA聚合酶是经过配体修饰的Tth DNA Polymerase,高温加热前,配体抑制聚合酶的活性,从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。可广泛应用于各种特异性PCR反应,与Taq酶相比对血源性抑制物等抑制成分更加耐受。在Mn2+存在下,表现更强的反转录活性,可以用来进行单管一步法RT-PCR反应。
- 同时具有反转录酶活性与聚合酶活性,能够用于一步法检测。
- 具有更高的反转录温度60℃~70℃,反转录的特异性高。
- 对PCR抑制物具有更高的耐受性。
组分 | 250U | 1250U |
HotStart Tth DNA Polymerase(5U/μL) | 50μL | 250μL |
10×PCR Buffer | 500μL | 2.5mL |
5×RT-PCR Buffer(Mn2+-Free) | 1mL | 5mL |
MnCl2(25mM) | 300μL | 1.5mL |
保存:-20℃
- HotStart Tth DNA Polymerase的反转录温度在60℃~70℃,反转录时间可以为15~30min;
- 该体系更适合于特异性引物进行RT反应,并且引物Tm值应为60℃或更高温度;
- 反应体系中含有Mn2+,因此,本体系保真度有所降低,不适合于保真度要求较高的克隆、测序等实验;
- 使用时请上下颠倒轻轻混合,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,尽量避免污染。
使用时请上下颠倒轻轻混合,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,尽量避免污染。
- 用于PCR反应
- 常用PCR反应体系:
成分 用量 10×PCR Buffer 2μL HotStart Tth DNA Polymerase(5U/μL) 1μL dNTPs(10mM) 0.5μL 上游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 下游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 模板 5~500ng RNase-Free Water 至20μL - 推荐PCR反应程序:
温度 时间 循环数 95℃ 3min 1 94℃ 30s 35~40 55℃ 30s 72℃ 45s 72℃ 7min 1
- 常用PCR反应体系:
- 用于RT-PCR反应
- 常用RT-PCR反应体系:
成分 用量 5×RT-PCR Buffer 4μL HotStart Tth DNA Polymerase(5U/μL) 1μL MnCl2(25mM) 1μL dNTPs(10mM) 0.5μL 上游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 下游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 模板 5~500ng RNase-Free Water 至20μL - 推荐RT-PCR反应程序:
温度 时间 循环数 90℃ 30s 1 60℃ 25min 1 94℃ 3min 1 94℃ 30s 35~40 55℃ 30s 72℃ 45s 72℃ 7min 1
- 常用RT-PCR反应体系:
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